Что это такое ПЦР-диагностика

Содержание статьи

1. Немного теории
2. Что это такое – ПЦР-диагностика у мужчин: расшифровка понятия и что показывает этот анализ
3. Применение ПЦР-диагностики
4. Преимущества и недостатки метода
5. Сбор образцов для ПЦР
6. Интерпретация результатов
7. Подготовка мужчины к сдаче мазка для анализа ПЦР

Сегодня медицинские работники в лаборатории с помощью разных методик могут находить патогенный агент в незначительном количестве биоматериала и даже при отсутствии выраженных симптомов заболевания. Точным, высокочувствительным и доступным способом обнаружения инфекции является полимеразная цепная реакция. О том, что это такое – анализ методом ПЦР, в том числе кала и на ИППП, а также как его делают, читайте в нашей статье.

Немного теории

Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) – это сложная молекула, представляющая две нити соединенные между собой в строгом порядке нуклеотидов, скрученных в спираль. Она содержит генетическую информацию всего живого на планете, начиная от бактерий и заканчивая людьми (исключение составляют некоторые РНК-вирусы). Если у человека в организме есть возбудитель того или иного заболевания, то обнаружить его еще до проявления признаков болезни можно именно по наличию в образцах биоматериала чужеродного генома.

Впервые идею по увеличению числа копий, т. е. амплификации ДНК в лабораторных условиях предложил еще в начале 70-х годов ХХ века Хьелль Клеппе. Но тот вариант, который получил широкое распространение, был открыт значительно позже – в 1983 году американцем Кэри Муллисом. Через десять лет после своего изобретения ученый удостоился Нобелевской премии по химии.

С помощью специального фермента – ДНК-полимеразы, происходит многократное увеличение количества участка нити дезоксирибонуклеиновой кислоты даже вне тела человека. Благодаря этому можно обнаружить чужеродный геном, например микроорганизма или гельминта, даже если его количество в образце незначительно.

Сегодня данный способ идентификации патогенных агентов широко применяется в различных областях медицины, а также в криминалистике и генной инженерии.

Что это такое – ПЦР-диагностика у мужчин: расшифровка понятия и что показывает этот анализ

Полимеразная цепная реакция – это молекулярно-генетический метод нахождения в материале определенных участков молекулы ДНК.

Каждая двойная спираль имеет свою специфическую, свойственную только ей последовательность нуклеотидов. Суть теста в том, что в образец с биоматериалом добавляются специальные компоненты – праймеры, т. е. куски с заданным набором азотистых оснований и фосфатных групп, которые провоцирую репликацию дезоксирибонуклеиновой кислоты. Они комплементарны разным концам строго определенного участка конкретной молекулы.

Если в пробе есть ДНК с подходящим порядком нуклеотидов, то под воздействием специального фермента – полимеразы, начинает происходить ее амплификация, то есть многократное увеличение количества ее копий. Это свидетельствует о наличии искомой инфекции во взятой пробе.

Если нужной части нет, то праймерам не с чем связываться и цепная реакция не происходит. Это исключает возможность ложноположительного результата данного метода. Но для чистоты исследования необходимо строго выполнять все требования по забору и хранению материала.

В лаборатории данный процесс проводят на специальном аппарате – амплификаторе, который обеспечивает изменения температуры, необходимые для совершения трех последовательных стадий:

• Денатурации. Это нагревание с целью разъединения нитей цепи ДНК.
• Отжига. На данном этапе происходит связь праймеров с определенными участками молекулы.
• Элонгации. Т. е. непосредственного копирования заданных частей генома.

Применение ПЦР-диагностики

Данная методика в сочетании с классическими лабораторными исследованиями широко используется в медицине для обнаружения различных инфекционных агентов как бактериальной, так и вирусной природы. Особенно часто ее выбирают для нахождения малоизученных и атипичных микроорганизмов, а также внутриклеточных паразитов.

• Практикующие врачи назначают анализ для определения причины многих воспалительных заболеваний различных органов и систем, например, при пневмонии.
• В урологии к такому тесту прибегают при уретрите, орхите, эпидидимите. Нередко ПЦР назначают для определения причины воспаления предстательной железы. Эффективным средством в борьбе с таким недугом является препарат Простатилен АЦ. В его составе уникальная запатентованная формула, которая клинически доказала свою эффективность при лечении простатита.
• Важную роль данный метод играет в постановке диагноза на микоплазмоз, уреаплазмоз, хламидиоз, гарднереллез. Эти возбудители относятся к условно-патогенной микрофлоре, являются мельчайшими внутриклеточными паразитами. Патологии, вызванные этими инфекциями, характеризуются скрытым течением и часто никак не проявляются. Но их последствия могут быть очень опасными для репродуктивного здоровья, в том числе вызвать бесплодие.

• Многие ЗППП можно выявить с помощью ПЦР. Среди них генитальный герпес, вирус папилломы человека, гонорея, сифилис, ВИЧ и СПИД.
• Метод необходим для определения ряда специфических недугов бактериальной природы, например, туберкулеза, дифтерии, сальмонеллеза, листериоза и прочих.
• С помощью описываемого способа находят бактерию Helicobacter pylori, которая является основной причиной язвы желудка, гастритов и дуоденитов.

ПЦР позволяет изучать наследственные патологии и определять склонность к ним. Также метод используется при установлении отцовства.

Есть возможность применять данный тест в персонализированной медицине. При этом проводят исследования генетической предрасположенности к непереносимости того или иного лекарства.

Помимо медицины, этот тест широко используется в криминалистике. Благодаря высокой точности даже по небольшому количеству ДНК в уликах с места преступления можно вычислить преступника после сопоставления полученных результатов с данными, взятыми у подозреваемого.

Преимущества и недостатки метода

Широкое распространение во многих областях жизни, а главным образом в медицине, полимеразная цепная реакция приобрела благодаря своим сильным сторонам. Положительными характеристиками теста являются:

• Прямой способ нахождения патогенного агента. Обнаружение антител может быть лишь косвенным свидетельством инфекции в организме, тогда как ПЦР позволяет доказать непосредственное наличие микроорганизма.
• Высокая точность. Использование праймеров, строго специфичных лишь одной определенной молекуле ДНК, позволяет диагностировать возбудителя с точностью до 100%.
• Чувствительность. Особенности способа дают возможность обнаружить бактерию или вирус, даже когда их количество в организме крайне мало.
• Большие возможности для анализа. Для проведения реакции подходят различные образцы биоматериалов – кровь, моча, кал, мазки и прочие.
• Возможность нахождения сразу нескольких заданных параметров. Современное оборудование можно настроить таким образом, чтобы в ходе одного исследования выявить определенное количество возбудителей.

• Многофункциональность. Данная методика подходит для обнаружения огромного количества инфекций, в том числе ЗППП, а также паразитов. Применение генных компонентов позволяет использовать ПЦР для определения отцовства.
• Скорость. Среднее время выполнения исследования около 5 часов.
• Возможность ранней диагностики. Точность реакции показывает наличие заболевания еще в доклинический период, а также при хроническом и стертом течении. Благодаря чему можно купировать недуг в самом начале его развития.
• Доступность. Благодаря широкому использованию, цена такого метода сопоставима с другими лабораторными исследованиями.
• Фиксация результата. Все проводимые процессы можно сохранить на компьютере, сделав копию снимка экрана. Это избавит от вопросов относительно правильности заключения врача.

Несмотря на неоспоримые преимущества данного метода, у него есть и некоторые нюансы, которые можно считать его слабыми сторонами:

• Амплификация ДНК происходит как у живого, так и уже погибшего возбудителя. Это означает, что анализ ПЦР дает вероятность ложноположительного результата уже после избавления от инфекции. Поэтому контрольную диагностику следует проводить не ранее, чем через 1-2 месяца после завершения курса лечения.
• Иногда происходят мутации микроорганизмов, что не дает обнаружить искомую молекулу в исследуемом образце.
• Для правильного проведения процедуры необходима лаборатория высокого уровня, хорошо оснащенная всеми требуемыми аппаратами и реактивами.
• Сотрудники, работающие с данной методикой, должно пройти специальное обучение и обладать нужной квалификацией.
• Любое нарушение в технологическом процессе, сборе или транспортировке материала может исказить результаты теста.

Исходя из вышесказанного, мы настоятельно рекомендуем обращаться для проведения полимеразной цепной реакции в проверенные клиники, которые сотрудничают с лицензированными лабораториями.

Сбор образцов для ПЦР

Одним из неоспоримых преимуществ методики является широкий выбор биологических сред, используемых для анализа. Материалом могут служить:

1. Соскобы. Мазки берут со слизистых оболочек уретры, шейки матки, с конъюнктивы, покровов органов дыхания. Чаще всего именно такая проба нужна при диагностике ЗППП.
2. Моча. Исследуется урина для обнаружения возбудителя в мочевыводящих органах.
3. Кал. В лаборатории могут проводить изучение фекалий на наличие Helicobacter pylori, но чаще с этой целью берут биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки. Также этот материал используется для нахождения ДНК глистов.
4. Мокрота. Сдается для подтверждения туберкулеза легких, реже микоплазмоза и хламидиоза, вызывающих пневмонии.
5. Кровь и ее составляющие. Необходимы для диагностирования герпеса, ВИЧ, СПИДа, цитомегаловируса, а также при генетических экспертизах.
6. Другие биологические жидкости. В зависимости от показаний используются спинномозговая, суставная, плевральная жидкости, сок простаты, сперма, слюна.

В заборе биоматериала есть свои тонкости и нюансы, поэтому их должен осуществлять врач, имеющий специальную подготовку.

Недопустимо попадание различных примесей и компонентов в образцы, так как это может исказить результаты анализа.

При комнатной температуре пробы хранят не более двух часов, в холодильнике при +4 оС можно продержать их еще сутки. При необходимости можно заморозить содержимое. Это продлит срок хранения до двух недель.

Перевозку материала в лабораторию осуществляют в специальных термосах, обеспечивающих оптимальные условия для сохранности материала.

Интерпретация результатов

Итог теста может быть:

• Положительным – такой результат подтверждает наличие искомой инфекции в теле пациента.
• Отрицательный вывод говорит о том, что заданный участок ДНК не найден, т. е. патогенный агент не обнаружен.

Но бывают случаи, когда нельзя так однозначно интерпретировать, что показывает ПЦР-анализ мазка или другого биологического образца. Редко возможны ложноположительные или ложноотрицательные показания. Это зависит от точности соблюдения правил забора материала, его транспортировки и соблюдения технологического процесса.

Поэтому расшифровкой заключения должен заниматься врач, имеющий соответствующую квалификацию. Самому разобраться в медицинских бланках бывает крайне трудно. Это может лишь запутать пациента, особенно если у него нет никаких проявлений заболевания.

Подготовка мужчины к сдаче мазка для анализа ПЦР

Чтобы не было искажения результатов по причине неправильно собранного материала, необходимо подготовиться к сбору материала для полимеразной цепной реакции. Более детальные условия подготовки расскажет лечащий врач в зависимости от исследуемого содержимого.

Общие рекомендации:

• Перед сдачей спермы или урогенитальной пробы необходим трехдневный период воздержания от половой близости. В это же время не следует посещать бани и подвергаться другому перегреву, желательно исключить из рациона вредные продукты, жареное, жирное, копченое, а также алкоголь. Прием антибиотиков стоит прекратить минимум за 14 дней до посещения врача. В день сдачи мазка или семени нельзя мочиться за 3 часа до похода в процедурный кабинет.
• Кровь берут утром из вены на голодный желудок. Пить до взятия образца также не разрешается.
• Для пробы слюны нужно исключить еду за 4 часа перед ее забором. Непосредственно в кабинете доктор попросит прополоскать рот и немного помассировать щеку для стимулирования работы слюнной железы.

Мы рассмотрели, что это такое – ПЦР-диагностика, когда необходим этот анализ и как правильно его сдавать. Наглядно процесс полимеразной цепной реакции вы можете посмотреть в видео ниже.